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Ceturegel基质胶应用-胰腺癌类器官构建流程!

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-08-15T00:00 (访问量:33842)

 

2024年4月4日CA: A Cancer Journal for Clinicians期刊发布了最新的2022年全球癌症数据统计。根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)的最新评估数据,2022年全球癌症新增病例1996万例,全球癌症死亡病例974万例。2022年癌症死亡病例数前十的癌症分别是肺癌(182万,18.7%)、结直肠癌(90万,9.3%)、肝癌(76万,7.8%)、女性乳腺癌(67万,6.9%) 、胃癌(66万,6.8%)、胰腺癌(47万,4.8%)、食道癌(44.5万,4.6%)、前列腺癌(40万,4.1%)、宫颈癌(35万,3.6%)、白血病(30.5万,3.1%)。

 

图.2022年全球癌症的病例和死亡分布类型

 

其中胰腺癌是一种恶性度高、治疗效果差的肿瘤,胰腺癌的五年生存率约为10%,被医学界称为“癌中之王”。但是并非完全不能治疗,对于早期发现的胰腺癌,可以通过根治性手术结合术后化疗、放疗等综合治疗。因此针对不同病人找到合适的治疗药物是关键所在。

 

胰腺癌类器官(organoids)是指利用胰腺瘤细胞等在体外培养出的3D细胞培养物并具有一定的空间结构组织类似物。胰腺癌类器官可以作为疾病模型,相较于传统2D疾病模型,其在阐明疾病的发展、稳态性和发病机理等与体内环境更加接近,能作为胰腺癌治疗、诊段和发病机制研究的理想试验模型。

 

 

胰腺癌类器官构建实验步骤

  01 取材:标本离体后,尽快取材。采用无菌器械,保证无菌环境,将肿瘤组织放入含有5 mL的原代组织保存液的 15 mL 离心管中,4℃转运;02 

清洗:在生物安全柜中取出样品管,去除组织保存液,加入适量冷的添加有双抗的 PBS,反复清洗后,去除 PBS;

03 重复清洗:重复第 2 步骤 3 次;04 组织处理:去除 PBS缓冲液后,将组织块移至10 cm含10 mL冷原代 组织保存液的无菌培养皿中,用无菌眼科显微剪将组织剪碎(直径约 0.5mm~1mm);05 

重复清洗:使用常温PBS,重复第2步骤3次;

06 

收集组织碎片,加入组织消化液消化,因胰腺癌组织较硬,消化需要时间30 min,重复2-3次,过70 μm筛网,收集胰腺癌细胞;

07 

红细胞裂解:加入10 mL红细胞裂解缓冲液,室温下在翘板摇床上摇10 min;

08 

重复清洗:裂解完毕,使用常温 DMEM/F12,重复第 2步骤3次;

09 

类器官种板:调整细胞密度为2~3×106,与Ceturegel基质胶1:1均匀混合,将细胞混悬液以40-60 uL每孔种在24孔板中,37℃放置15~30 min,加入预热的类器官培养液,每个孔 750 uL;

10 

类器官培养:将培养板放在 37℃  CO2培养箱培养,每2天更换培养液。加入培养液时,吸头朝向侧壁,缓慢加入;

11 

重复清洗:使用常温PBS,重复第2步骤3次;类器官观察:每天观察类器官并拍照,了解初始类器官数量、增殖速 度、形态、微生物污染情况等。

 

 

实验结果

 

图.胰腺癌组织(上图)和癌旁(下图)类器官不同周期培养结果(P为培养代次,d为培养时间)

 

 

 

FAQ

 Q 

基质胶的操作要注意哪些事项?

所有操作需在无菌环境下进行,应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。

 

 

Q 

获取临床样本,如何避免污染?

①取材时尽量保证无菌取材;

②提取前可以用含双抗的PBS浸泡几分钟:常见与外界环境有接触可能的胃、肠、膀胱等位置肿瘤建议用含3%~5%双抗的PBS浸泡5-10 min,其他常见肿瘤用含1%~2%双抗的PBS浸泡5min左右;
③提取细胞过程中所用试剂均加1%双抗及合适浓度的原代抗生素。

 

 

Q 

肿瘤组织采集、保存、运输注意事项

尽可能多采集肿瘤细胞含量高的肿瘤组织,并缩短组织样本在空气中暴露的时间,以减少污染概率;采集的肿瘤组织样本尽快置于装有专用样本保存液的无菌管中,低温(4 ℃左右)下快速运转至检测单位(尽量保证采样后2~4 h内送到)。

 

 

Q 

病灶和癌旁培养出的类器官有区别吗?肿瘤组织的取材部位有什么要求?

有差别,肿瘤本身具有异质性,不同来源的类器官之间存在差异是很常见的现象,从形态上看,原发病灶来源的类器官比癌旁来源的类器官更具有侵袭性的结构,一般病灶形态上更加不规则一些。如果希望在建模或药物筛选方面尽量减小误差,可以在活性好的地方多位置取样。

 

 

 

产品选择

 

产品名称

产品编号

规格

Cebrary®Tissue Digestion Solution  组织消化液

41423ES10/30

10/30 mL

Cebrary®Cell recovery solution for Organoid类器官回收液

41421ES30/60

30/100 mL

Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 类器官冻存液

41422ES30/60

30/100 mL

Cebrary® Pancreatic Cancer Organoid Growth Medium(Human)胰腺癌类器官生长培养基

41434ES60/76

100/500 mL

Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

40191ES08/10

5/10 mL

 

 

相关产品

 

产品类型

产品名称

产品编号

规格

基本浓度

Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶

40183ES08/10

5/10 mL

Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

40184ES08/10

5/10 mL

低生长因子

Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶

40185ES08/10

5/10 mL

Ceturegel® Matrix GFR, Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

40186ES08/10

5/10 mL

 

高浓度

Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶

40187ES08/10

5/10 mL

Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

40188ES08/10

5/10 mL

Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质胶

40189ES08/10

5/10 mL

干细胞专用

Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶

40190ES08/10

5/10 mL

 

鼠尾胶原

Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾胶原蛋白I (大鼠尾)

40125ES10/50

2/10 mL

Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾胶原蛋白I型 (小鼠尾)

40136ES10/50

2/10 mL

 

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