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Anti-Flag Magnetic Beads | Anti-Flag 磁珠 | MedChemExpress (MCE)

作者:MedChemExpress LLC 暂无发布时间 (访问量:8594)

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Anti-Flag 磁珠

MCE 国际站:Anti-Flag Magnetic Beads

品牌:MedChemExpress (MCE)

货号:HY-K0207

中文名称:Anti-Flag 磁珠

存储条件:4°C,2年请勿离心、干燥或冷冻磁珠。

产品活性:Anti-Flag 磁珠可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标记蛋白的免疫沉淀(IP)实验,也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白质纯化实验。

生物活性:Anti-Flag 磁珠由高质量的鼠源 IgG1 单克隆抗体与氨基磁珠共价偶联制备,可识别 Flag 标签 (DYKDDDDK) 重组蛋白。 1. 免疫沉淀时只需少量磁珠。 2. 方便省时。 3. 非特异性结合率低。 4. 样品损失少。 5. 蛋白质结合能力高达 0.6 mg/mL。 6. 稳定。

操作流程:1. 抗原样品制备根据不同的样品选择合适的处理方法2. 磁珠预处理混悬 Anti-Flag 磁珠,取 10 μL 磁珠,置于 1.5 mL EP 管中,加入 500 μL 洗涤缓冲液,充分混悬,置于磁力架上磁性分离,弃上清。重复以上洗涤步骤 2 次。3. 样品的结合在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 细胞裂解液,充分混悬,置于翻转混合仪孵育,室温孵育 2 小时或者 4℃ 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离,弃上清。注: 结合过程中,磁珠可能会出现聚团或呈片状,属于正常现象,不会影响实验结果。4. 洗涤在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 洗涤缓冲液,充分混悬磁珠,磁性分离,弃上清。重复以上洗涤步骤 3 次,直到洗涤后的上清液中 OD280 小于0.05 为止。注: 如上清液的 OD280 大于 0.05,适当增加洗涤次数即可。5. 洗脱本说明书提供三种 Flag 标签蛋白洗脱方案,操作者可以根据后期检测的需要选择不同的洗脱方案。1) 变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。步骤:分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀,95°C 加热 5 分钟。分离磁珠,收集上清至新的 EP 管,进行 SDS-PAGE 检测。2) 酸性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有生物活性,可用于后期功能分析。步骤:分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入 50 μL 的洗脱缓冲液 A (0.15 M Glycine, pH 2.5-3.1) 混合均匀,室温孵育 10 分钟。分离磁珠,收集上清至新的 EP 管,按每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液 (1 M Tris-HCl, pH 8.0),将洗脱产物 pH 调节至中性,样品用于后期功能分析。3) 竞争性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有生物活性,可用于后期功能分析。步骤:分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液 B (1 mg/mL 3× Flag peptide, 50 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH 7.4)混合均匀,室温孵育 1 小时或者 4°C 条件下孵育 1-2 小时。分离磁珠,收集上清至新的 EP 管,即为目的蛋白,样品用于后期功能分析。

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•   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告,确保产品的高纯度、高品质;
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