PP1

MCE 国际站：PP1

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-13804

CAS：172889-26-8

Synonyms：AGL 1872; EI 275

纯度：0.99

存储条件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年溶剂中 -80°C 2 年 -20°C 1 年

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：PP1 是一种有效的选择性 Src 家族抑制剂，抑制 Lck 和 Fyn，IC50 分别为 5 和 6 nM。

细胞实验：纯化的人外周血 T 细胞中抗 CD3 刺激的酪氨酸磷酸化的抑制测量如下。所有孵育均在 37°C 的 Eppendorf Thermomixer 5436 中进行，混合设置为 11。细胞（100 μL RPMI 1640 培养基中的 1×106）与药物孵育 15 分钟，然后与 1 μg 抗 CD3/mL（抗 leu4，100 μg/mL）孵育 6 分钟。反应的最终体积为 115 μL。通过添加 57.5 μL 3× 溶解缓冲液（在添加前在 100°C 下孵育）来终止反应。将样品混合，煮沸 5 分钟，并储存在 -70°C 下。在 10% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上对这些细胞裂解物进行蛋白质印迹分析，用多克隆抗磷酸酪氨酸抗体进行检测，用 I 标记的蛋白 A (ICN) 检测免疫复合物。为了进行定量分析，使用 Molecular Dynamics 激光扫描仪扫描胶片，并在抗 CD3 存在下（有和无药物）定量主要底物带 p70 的光密度。抑制百分比计算如下：(1-(有药物时的 p70 光密度单位/无药物时的 p70 单位))×100。IC50 等于测量到 50% 抑制时的化合物浓度[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：将 Protein A-Sepharose 珠子（制备成 50% (w/v) 悬浮液）以 250 μL/mL 的浓度加入抗体/裂解物混合物中，并在 4°C 下孵育 30 分钟。然后将珠子在 1 mL 裂解缓冲液中清洗两次，在 1 mL 激酶缓冲液中清洗两次（25 mM HEPES、3 mM MnCl2、5 mM MgCl2 和 100 μM 正钒酸钠），并在激酶缓冲液中重新悬浮至 50% (w/v)。将 25 微升珠子悬浮液与适当浓度的化合物和 [γ-32P]ATP（25 μL/孔，200 μCi/mL 激酶缓冲液溶液）一起加入到涂有烯醇化酶的 96 孔高蛋白结合板的每个孔中。在 20°C 下孵育 20 分钟后，将 60 μL 含有 10 mM ATP 的沸腾 2× 溶解缓冲液添加到测定孔中以终止反应。从孔中取出 30 微升样品，煮沸 5 分钟，然后在 7.5% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上运行。随后将凝胶干燥并暴露于柯达 X-AR 胶片。为了定量，使用 Molecular Dynamics 激光扫描仪扫描胶片，并确定主要底物带烯醇化酶 p46 的光密度。从化合物的密度与浓度图中确定导致 50% 烯醇化酶磷酸化抑制 (IC50) 的化合物浓度。在测量化合物对抗 Lck 活性的配套实验中，使用 50 mM EDTA、1 mM ATP 在 Skatron 收集器上对测定板进行两次清洗循环。然后将闪烁液（100 μL）加入孔中，使用 Pharmacia Biotech 微型 β 计数器测量 P 掺入量。通过绘制酶活性抑制百分比与化合物浓度的关系图，可确定导致 50% 酶活性抑制的化合物浓度 (IC50)[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

IC50 & Target：5 nM (Lck), 6 nM (Fyn), 250 nM (EGFR), >50 μM (JAK2)[1]

参考文献：

[1]. Hanke JH, et al. Discovery of a novel, potent, and Src family-selective tyrosine kinase inhibitor. Study of Lck- and FynT-dependent T cell activation. J Biol Chem. 1996 Jan 12;271(2):695-701.

品牌介绍:
•   MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库，我们致力于为全球科研客户提供前沿最全的高品质小分子活性化合物；
•   50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域；
•   产品种类涵盖各种重组蛋白，多肽，常用试剂盒，更有 PROTAC、ADC 等特色产品，广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目；
•   提供虚拟筛选，离子通道筛选，代谢组学分析检测分析，药物筛选等专业技术服务；
•   设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系；
•   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告，确保产品的高纯度、高品质；
•   产品的生物活性多经各国客户实验验证；
•   Nature, Cell, Science 等多种顶级期刊及制药专利收录了MCE客户的科研成果；
•   专业团队跟踪最新的制药及生命科学研究进展，为您提供全球最新的活性化合物；
•   与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。