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宏基因组
一、产品概述
宏基因组(metagenomics),是由Handelsman 等1998年提出的新名词, 其定义生境中全部微小生物遗传物质的总和。宏基因组学是以环境样品中的微生物群体基因组为研究对象,以功能基因筛选或测序分析为研究手段,以微生物多样性、种群结构、进化关系、功能活性、相互协作关系及与环境之间的关系为研究目的的新的微生物研究方法。
据估计,人体共生的微生物细胞数量约为人体细胞的10倍左右,其中大部分位于肠道内。宏基因组技术摆脱了大部分共生细菌无法分离培养的限制,极大的促进了人体共生微生物的研究,探索与疾病关联的微生物,开发疾病诊断的生物靶标等。
目前研究宏基因组的方法主要有16S/18S/ITS rDNA测序,全基因组测序,全转录组测序三种。三种方法各有优缺点,既可以根据研究目的选用其中的某种,也可以多种方法综合使用。
二、技术路线
三、技术参数
1、样品要求
16S/18S/ITS rDNA 测序:
1. 样品类型: PCR 扩增产物;
2. 样品需求量(单次):小片段文库,≥ 3μg;
3. 样品浓度:≥30ng/ul;
4. 样品纯度:OD260/280=1.8~2.0;
全基因组测序:
1. 样品类型:双链DNA样品;
2. 样品需求量(单次):小片段文库,≥ 4μg;
3. 样品浓度:≥ 30ng/ul;
4. 样品纯度:OD260/280=1.8~2.0。
全转录组测序:
1. 样品类型:双链cDNA或mRNA或完整总RNA(去蛋白并进行DNase处理)
1. cDNA样品
1.1 样品需求量(单次):≥ 2μg,总样品量需根据实验策略,如建库类型及
建库数量而定;
1.2 样品浓度:≥ 15ng/ul;
1.3 片段主要分布在 1K 以上
1.4 样品纯度:OD260/280 =1.8~2.2;
2. RNA样品
2.1 样品需求量(单次):≥ 10μg;
2.2 样品浓度:≥65ng/ul;
2.3 样品纯度:OD260/280 =1.8~2.2;OD260/230 ≥ 2.0;RIN ≥ 6;23S:16S=1.0.
2、执行周期
执行周期约为60个工作日,具体项目周期需跟技术支持人员确定。