Hieff Trans 脂质体核酸转染试剂
     
     
 
产品信息
产品名称
产品编号
规格
储存
价格（元）
促销（元）
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent  脂质体核酸转染试剂
40802ES02
0.5ml
4℃
738.00
488.00
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent脂质体核酸转染试剂
40802ES03
1 ml
4℃
1308.00
868.00
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂
40802ES08
5×1ml
4℃
4878.00
3248.00
产品描述
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-Hieff TransTM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff TransTM以无菌的液体形式提供。通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做160 次转染；
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品4oC保存，一年有效。不可冷冻！
注意事项
1）Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 μg DNA和1-1.5 μl 转染试剂。通过调整DNA/Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板为例，其他培养板加样体积请参考表一）
【注】：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
贴壁细胞：转染前一天（20-24小时），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板（不含抗生素），使其在转染时密度为90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。
悬浮细胞：转染当天，配制DNA复合物之前，24孔板中细胞铺板，每500μl生长培养基（不含抗生素）中加入4-8×105 cells。
1. 按照以下体系配制DNA-Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂复合物：
1）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.5μg DNA。混匀。
2）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.6-2.5 μl Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂。
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂稀释后室温孵育5min（在30min内同稀释的DNA 混合，保温时间过长会降低活性）。
【注意】：即使脂质体核酸转染试剂使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用DMEM 培养。如果DMEM 作为脂质体核酸转染试剂的稀释液，必须在5min内同稀释的DNA混合。
2. 混合稀释的DNA和稀释的脂质体核酸转染试剂（总体积100μl），轻轻混匀，并在室温（15-25℃）孵育20min，使得DNA-脂质体复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5h。
3. 直接将100μl DNA-Hieff TransTM复合物加入到细胞培养板每个孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
【注意】：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为500μl无血清培养基。
4. 37℃，5% CO2培养箱培养24-48h，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
稳转细胞株：转染24h后，按照1：10或更高比例在细胞中加入新鲜生长培养基，转染48h后加入筛选培养基。
悬浮细胞株：在细胞中加入DNA-Hieff TransTM复合物后，如果需要可以4h后加入PMA和/或PHA。对于Jurkat细胞，PHA和PMA的终浓度分别为1μg/ml和50ng/ml，可以提高CMV启动子活性和基因表达。对于K562细胞，只加入PMA足以提高启动子活性。
转染体系的调整
对于不同的细胞培养板，Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂、DNA、细胞和培养基的使用量会有所不同，具体请参考下表（表一）。对于96 孔板培养，不需要提前一天进行细胞铺板，可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H，293-FTUNEology 波长可调检测卡盒-->